Southern blot

Bugünkü yazımızda Southern blot ile ilgili her şeyi inceleyeceğiz. Southern blot, ortaya çıkışından günümüz toplumu üzerindeki etkisine kadar farklı alanlarda büyük ilgi uyandırdı. Tarih boyunca Southern blot, hem kişisel hem de sosyal düzeyleri etkileyerek insanların yaşamlarında temel bir rol oynamıştır. Üstelik etkisi sınırları aşmış ve çeşitli alanlarda tartışmalara ve araştırmalara yol açmıştır. Bu makale aracılığıyla, Southern blot'in günümüzle olan ilgisini anlamak ve günlük hayatımızdaki rolü üzerine düşünmek için dünyasını derinlemesine inceleyeceğiz.

Southern blot, Edwin Southern tarafından geliştirilmiş moleküler genetikte kullanılan hibridizasyon yöntemlerinden biridir.

Uygun probların kolaylıkla elde ediliyor olması insanda özel bir genin, bu geni klonlamaya gerek kalmaksızın analizine olanak sağlamıştır.

Yöntem

Bu yöntemde restriksiyon enzimiyle DNA fragmentlere ayrılır. Bu enzimler DNA'yı tanıdıkları özel dizilerden kırarlar, böylece çeşitli büyüklüklerde fragmentler oluşur.[1] Agaroz jel elektroforez yöntemiyle büyüklüklerine göre sıraya ayrılan bu fragmentler önce bazik pH ile denatüre edilip blot yöntemi ile nitroselüloz filtreye geçirilir.[2] Bu yöntemde kılcallık etkisi kullanılarak çözeltiyle beraber içindeki DNA fragmentlerinin aktarılması sağlanır.[3] Fosfor-32 ile (veya nükleotitlerde bulunan atomların diğer bir radyoaktif analoğuyla) işaretli denatüre edilmiş ve incelenecek bölgeye bağlanacak şekilde hazırlanmış olan prob filtre üzerinde tutulan fragmentlerden kendisine uyanla hibridize olur, yani hidrojen bağı oluşturur. Sonrasında, filtre üzerine bir röntgen filmi konularak otoradyografi işlemi gerçekleştirilir. Bu işlemde radyoaktif probdan gelen radyasyon bağlandığı yerde iz bırakır ve bandı gösterir.[4] Günümüzde radyasyon yerine floresan problar da kullanılmaktadır.[5]

Ayrıca bakınız

Kaynakça

  1. ^ Çakır, Şevval (13 Kasım 2018). "Restriksiyon Endonükleazlar ve Fonksiyonları". Lab Akademi. Erişim tarihi: 14 Nisan 2025. 
  2. ^ Sapkota, Anupama (3 Haziran 2021). "Southern Blot- Definition, Principle, Steps, Results, Applications". microbenotes.com (İngilizce). Erişim tarihi: 14 Nisan 2025. 
  3. ^ Southern, Ed (Ağustos 2006). "Southern blotting". Nature Protocols (İngilizce). 1 (2): 518–525. doi:10.1038/nprot.2006.73. ISSN 1754-2189. Erişim tarihi: 14 Nisan 2025. 
  4. ^ Mattaini, Katherine (5 Şubat 2022). "Southern blot" (İngilizce). 
  5. ^ Cheng, Ying; Wang, Na; Ren, Zhenxing; Xu, Chenggang (Haziran 2022). "Development of fluorescence-based nucleic acid blot hybridization method using Cy5.5 labeled DNA probes". Journal of Microbiological Methods (İngilizce). 197: 106479. doi:10.1016/j.mimet.2022.106479. ISSN 0167-7012. Erişim tarihi: 14 Nisan 2025.